Конспект лекций по биофизике

3. Стерины – холестерин, ?-ситостерин, эргостерин, зимостерин и т.д.

4. Минорные липиды - ?-каротин, витамин К.

II. Группы:

1. Нейтральные липиды – холестерин, триглицериды.

2. Цвиттерионы – 2 заряда диполя – фосфотидилэтаноламин,

фосфотидилхолин.

3. Липиды – слабые кислоты, фосфотидилсерин.

4. Липиды – сильные кислоты – фосфотидиловые кислоты и сульфокислоты.

Мембранные белки

С трудом поддаются выделению, многие вообще не выделяются без нарушения

структуры. Белки в мембране отличаются большим разнообразием. Большинство

белков в мембране находятся в виде клубка, 30% белков могут находится на

поверхности мембраны в виде спирали. Существует несколько классификаций

мембранных белков:

I. Функциональная классификация

1. ферментативные,

2. транспортные,

3. рецепторные,

4. каналообразующие,

5. воротные,

6. структурные.

II. Классификация по локализации по отношению к липидам.

1. интегральные,

2. периферические.

Интегральные белки погружены в мембрану или пронизывают ее насквозь.

Периферические белки на поверхности мембраны и слабо связаны с ней – слабые

взаимодействия. На поверхности интегральных белков имеется значительно

меньше участков, несущих электрический заряд, чем на поверхности

периферических белков.

Вандеркой и Капалди 1972 г. – все аминокислоты делятся на полярные,

неполярные и промежуточные. Полярность а-к первой группы приняли за 1,

полярность а-к второй группы – за 0, полярность а-к третьей группы – за Ѕ.

Изучили состав периферических и интегральных белков: 20 видов мембранных

белков: средняя полярность всех белков равна 0,46; интегральные белки имеют

полярность от 0,3 до 0,4; периферические белки имеют полярность от 0,41 до

0,53.

Углеводы мембран

В связанном виде не встречаются. В состав мембранных углеводов входят

следующие сахара:

- Д-галактоза,

- Д-глюкоза,

- ацетилглюкозамин,

- ацетилгалактозамин,

- Д-фруктоза,

- Д-манноза,

- Д-ксилоза.

Родопсин – гликопротеин оболочки сетчатки, состоит из углеводородной

цепочки (4%), связанной с белками М=28000 Да. Гликопротеиды являются

рецепторами для гормонов, медиаторов, пептидов и др. Большое кол-во

гликопротеидов в вирусных оболочках (до 40% оболочки).

Вода

С ней связаны многие структурно-функциональные свойства мембран, а так

же процессы стабилизации и формирования мембран. Вода входит в состав

мембран и делится на свободную, связанную и захваченную. Связанная и

свободная вода различается по подвижности молекул воды и растворяющей

способности. Наименьшей подвижностью и растворяющей способностью обладает

внутренняя связанная вода. Она присутствует в липидной зоне мембран в виде

отдельных молекул. Основную часть связанной воды представляет вода

гидратных оболочек. Эта вода окружает полярные группы белков и липидов,

имеет min подвижность и практически не обладает свойствами растворителя.

Свободная вода в порах и каналах. По ней могут перемещаться свободные ионы.

Она является хорошим растворителем, подвижная и обладает всеми свойствами

жидкой воды. Захваченная вода обладает изотопным движением, характерным для

жидкой воды, является хорошим растворителем. Она встречается в центральной

зоне мембран, между ее липидными слоями, но эта вода пространственно

делится как с внеклеточной жидкостью, так и с цитоплазмой. У нее нет

возможности свободно с ними обмениваться.

Струкрурная организация мембран

Плохо изучена, но внедряется электронная микроскопия, ЯМР, ЭПР.

Мембраны – 3х слойная структура с наружным и внутренним слоем, тонкие,

темные до 2,5 нм, внутренний слой между ними светлый до 3,5 нм. Считается,

что основой биомембран в большинстве случаев являются мембранные липиды.

1925 г. Грейбель и Гортер описали свойство фосфолипидов самопроизвольное

образованием ими угла биомолекулярного слоя с замкнутой поверхностью в

водной среде. Липиды образуют шаровидные образования.

Рисунок. В другой работе показано, что

такие образования сохраняют устойчивость, если

внешний d этой замкнутой поверхности не меннее

30 нм, так как чем меньше d, тем зазоры между

головками липидов больше и вода просачивается

внутрь замкнутого образования и нарушает

стабильность. Стабильность бислоя определяется

заряженными головками липидов.

Ассимметричность – 2ух слоев, они могут состоять из разным липидов.

Эритроцитарная мембрана: во внешнем слое много фосфатидилхолина и

сфингомиелина, во внутреннем слое много фосфатидилэтаноламина и

фосфатидилсерина. Во многих случаях неполярные хвосты содержат цепочки от

10 до 22 атомов С, между которыми могут быть насыщенные и ненасыщенные

связи, это обуславливает ряд свойств мембран. Чем больше ненасыщенных

связей, тем ниже t0 замерзания липидного бислоя. Внутренний слой бислоя

нерыхлый, он содержит множество холестерина, он заполняет пространство

между неполярными хвостами, влияет на t0 замерзания бислоя: чем больше

холестерина, тем ниже t0 кристаллизации. Холестерин участвует в

стабилизации мембран и будет влиять на проницаемость мембран, чем его

больше, тем ниже проницаемость мембраны.

Мембранные липиды обладают динамическими свойствами:

- способность липидной молекулы к латеральной диффузии, коэффициент

латеральной диффузии равен 3,25*10–8 см/сек. Коэф отражает

способность перемещения липидной молекулы вдоль мембраны,

- вращательная диффузия, К=10–9 сек,

- flip-flop переход, липидные молекулы пересекают мембрану, переходя из

одного слоя в другой. К=10–3 сек средняя величина, показывающая число

переходов – 1 переход в 1000 сек.

Организация мембранных белков

Большая часть мембранных белков находится в виде клубка (?70%), основная

часть может разворачиваться на поверхности липидного бислоя вследствие

электростатического взаимодействия с липидными головками. В этом случае

белки будут расположены на поверхности липидов в виде спирали.

Родоспин, М=28000 Да, форма сферы, d=4 нм, мелкая молекула.

Динамические свойства белков.

1. Латеральная диффузия. все значения для белков с М=100000, К=3*10–10

см/сек. Но белки могут объединяться в кластеры, которые мало

подвижны.

2. Вращательная диффузия К=0,34 сек.

3. flip-flop переходы, К=10–4 сек – частота flip-flop перехода.

Модели биологических мембран

В 1935 г. модель Даниэля Доусона унитарная модель

био мембран. Липидный бислой – структурная

основа. Наружный и внутренний слои – глобулярные

белки. Симметричная модель.

Модель Робертсона (середина 60х г). Мембрана представляет собой 3х слойную

структуру, средний слой из липидов. Белковые молекулы развернуты на

поверхности двойного липидного слоя вследствие электростатических

взаимодействий заряженными головками фосфолипидов. Модель Робертсона

ассимметрична, так как на наружной поверхности мембраны – гликопротеиды.

В группе моделей предполагается наличие белков

матрицы. Модель Лючи (середина 60х г.) – белково-

кристаллическая модель.

Модель _______________ (1970) сохраняется

концепция липидного бислоя, однако этот слой

прирастается участками симметрично расположенных

белков, они жестко фиксированны пространственно

за счет дальнодействующих белок-белковых свойств.

Модель Сенгера и Николсона. 60-70 г. Основа – липидный бислой, в который

включены молекулы интегральных и периферических белков.

Жидкомозаичная модель. С ее помощью объясняется проницаемость мембран.

Мембранный транспорт

Активный: вещества переносятся через мембрану против концентрационного,

электрического и других видов градиентов, на это тратится энергия

клеточного метаболизма. Первичный активный транспорт и вторичный активный

транспорт.

Пассивный: вещество без затрат энергии клеточного метаболизма переносится

через мембрану в направлении градиента. В его основе диффузия и осмос.

Диффузия

определяется движением молекулярных частиц по направлению концентрационного

градиента. Диффузия в физике рассматривается на примере простых моделей.

Для полной диффузии необходимо несколько суток. Для био систем скорость

диффузии не изменяется, но она осуществляется очень быстро. Процесс

диффузии через мембрану изучают на примере:

Скорость диффузии будет определяться

количеством вещества, диффундирующем в единицу

времени.

Закон Фика.

dQs/dt=Ds*A*dCs/dx

dQs/dt – количесво вещества диффундирующее в единицу времени

Ds – коэффициент диффузии

А – площадь поверхности

dCs/dx – концентрационный градиент (изменение концентрации вещества с

расстоянием)

Для скорости диффузии важной величиной является концентрационный

градиент. Коэф диффузии зависит от природы и молекулярной массы

растворенного вещества и растворителя. Из правого в левый движение

хаотичное, но оно не велико. Будут наблюдаться однонаправленные потоки –

количество растворенного вещества, пересекающих единицу площади поверхности

молекулы за 1 секунду в данном направлении.

Iоднонапр потока = dQs/dt , I измеряется в моль/см2*сек.

Однонаправленный поток вещества в одном направлении не зависит от потока

этого же вещества в противоположном направлении.

dQs/dt=P*(C1-C2),

для описания диффузии незаряженных молекул.

Р – проницаемость мембраны,

(C1-C2) – разность между концентрацией вещества 1 и 2.

[C]=моль/см3,

[P]=cм/с.

Скорость движения незаряженных молекул является линейной функцией

концентрационного градиента. Р является функцией рассматриваемых мембран и

диффунцирующего вещества.

Р=Дм*К/х,

Дм коэффициент диффузии вещества внутри мембраны (чем больше вязкость

мембраны, тем больше диффузия молекул, тем ниже эта величина). К-

коэффициент распределения. х – величина толщины мембраны. Коэффициент

проницаемости от 10–12 до 10–2 см/сек эритроцитарный.

Под действием антидиуретического гормона проницаемость мембраны может

возрастать в 10 раз.

Осмос

1748 г. – открытие осмоса. Офицально считается, что открыл Жан-Антуан

Молле. Особые свойства мочевого пузыря лягушки. установил, что эта мембрана

обладает особым свойством: если по одну сторону чистая вода, по другую

растворенные вещества (растворы сахаров). В этих условиях вода начинает

активно проникать через мембрану мочевого пузыря в раствор.

Осмос заключается в переходе молекул воды через

мембрану по направлениям ее концентрационных

градиентов. Наступает равновесие (динамическое)

определяется фактором осмотического давления

(направление слева направо).

Гидростатическое давление раствора в правом отсеке, когда эти два

давления уравновесили друг друга, то мы получим равновесие. Вывод: для

того, чтобы измерить осмотическое давление раствора нужно измерить

гидростатическое давление во втором отсеке.

В 1877 г. Пфейффер определил количественный показатель осмоса с помощью

осмометра (имеет полупроницаемую мембрану – из осадочного ферроцианида Сu).

Пфейффер сделал заключение – осмотическое давление пропорционально

концентрации растворенного вещества.

Вант-Гофер: в термодинамическом отношении молекулы воды ведут себя

подобно молекулам газа.

?=RTS или ?=RT?/V,

? – осмотическое давление,

RT? – количество молей вещества,

R – газовая постоянная,

Т – абсолютная температура,

С – концентрация.

Это выражение справедливо лишь для разбавленных растворов.

Осмотичность:

два раствора, в которых создается одинаковое осмотическое давление по

обе стороны мембраны проницаемой только для воды называются

изоосмотическими, растворы содержат в единице объема одинаковое число

растворенных молекул. Если один из растворов имеет осмотическое давление по

отношению к другому, то первый раствор называется гиперосмотически, второй

– гипоосмотическим.

Тоничность:

определяется по реакции клеток и тканей на их погружение в раствор; если

при погружении в раствор ткань не набухает, не сморщивается, такой раствор

называют изотоническим по отношению к ткани. Если при погружении ткань

набухает – раствор гипотонический, если ткань сморщивается – раствор

гипертонический.

Транспорт ионов

Необходимо учитывать и влияние электрических сил.

1. На заряженные частицы (органические и неорганические ионы) действуют

2 силы, определяющие их диффузию через мембрану: концентрационный

градиент и электрическая сила (определяется разностью потенциалов).

Совокупность этих двух сил составляет электрохимический потенциал.

2. Существует разность потенциалов, уравновешивающая действующий на

данный ион концентрационный градиент и предотвращающая

трансмембранный перенос данного иона. В этой ситуации будет

существовать некоторое состояние равновесия – электрохимическое

равновесие, а соответствующие потенциалы мембраны будут называться

равновесными потенциалами. Например, на мембране много К+, идет отток

К+. Если зарядить внутреннюю поверхность мембраны до –97 мВ, для Na+

равновесный потенциал ? +55 мВ.

3. Диффузия заряженных частиц может происходить против концентрационного

градиента, если электрический градиент будет направлен противоположно

концентрационному и будет превышать его действие.

Доннановское равновесие

Фредерик Доннан – физико-химик, 1911 г.

Если налить в сосуд с полупроницаемоей

перегородкой воды, то в 1 и 2 будет вода.

Доннан добавил в первый отсек соль KCl. По

прошествии определенного времени концентрации

различных ионов в двух отсеках стали равны.

Доннан взял соль с органическими ионами,

которые не проходят через мембрану. Через

некоторое время ионы K+ и Cl– начинают

диффунцировать. Наступает ситуация при которой

в первом отсеке [K+] больше, чем во втором, в

первом отсеке [Cl–] меньше, чем во втором.

Вывод: анион, не проходящий через мембрану оказывает на распределение

анионов и катионов, свободно проходящих через мембрану между отсеками.

Такая же ситуация наблюдается и в клетках и в биосистемах. Установленное

Доннаном равновесие обусловлено несколькими фактами:

1. Оба отсека по отдельности должны быть электронейтральными, то есть в

каждом отсеке число "+" ионов должно быть равно числу "–" ионов.

2. Диффундирующие ионы (K+ и Cl–) пересекают мембрану парами, при этом

сохраняется электронейтральность отсеков. Вероятность пересечения

мембраны этими ионами определятется произведением их концентраций

[K+]*[Cl–].

3. В равновесии скорость диффузии KCl в одном направлении равна скорости

диффузии KCl в противоположном направлении. Поэтому [K+]*[Cl–] должно

быть одинаковым для обоих отсеков.

Математическое выражение Доннановского равновесия:

[K+]2/[K+]1=([A–]1+[Cl–]1)/[Cl–]2.

Механизмы пассивного транспорта через мембраны

Пассивный транспорт осуществляется главным образом тремя способами:

1. Вещества, находящиеся в водной фазе по одну сторону мембраны,

растворяются в липидно-белковом слое мембраны, пересекают его и вновь

переходят в водную фазу с противоположной стороны мембраны.

2. Вещества, которые перемещаются через поры или каналы мембраны,

заполненные водой.

3. Молекулы транспортируемого вещества соединяются с молекулой

переносчиком, встроенным в мембрану и переносчик опосредует или облегчает

транспорт – этот транспорт называют облегченной или опосредованной

диффузией. Молекулы переносчика всегда жирорастворимы, они ускоряют

транспорт веществ по их концентрационному или электрохимическому

градиенту.

Первый механизм:

Простой транспорт. Он осуществляется под влиянием теплового движения

частиц. Для того, чтобы попасть из водной фазы в липидную, молекула должна

разорвать все свои водородные связи с водой, на это затрачивается энергия 5

ккал/моль водородных связей. Чем меньше молекула образует водородных

связей, тем больше ее шансы проникнуть через мембрану. Этот вид транспорта

только для незаряженных молекул. На подвижность молекулы внутри мембраны

будет влиять молекулярная масса и форма молекулы. Но самый главный фактор –

это коэффициент распределения. Он определяется экспериментально: берется

пробирка, соедржащая равные объемы (количества) воды и оливкового масла,

затем в нее добавляется исследуемое вещество. Пробирку хорошенько

встряхивают, чтобы смесь распределилась по всему объему. Затем определяют

концентрацию этого вещества в воде и в масле.

Коэф. распр. К = конц в-ва в липидной фазе / конц в-ва в водной фазе.

1937 г. Колландер Р. провел очень большие исследования на гигантских

клетках пресноводных водорослей, которые были посвящены изучению

зависимости коэф. распр. и проницаемости мембраны для веществ ( существует

некая генеральная зависимость.

Распределение точек для различных веществ. Но

были исключения, например H2O, CO2 и другие

мелкие незаряженные молекулы – наблюдаются

большие колебания К и проницаемости. Гексанол (1

ОН) и монитол (6 ОН) одинаковы по элементарному

составу. Это приводит к тому, что –ОН группы

образуют водородные связи с водой, поэтому

снижается растворимость вещества в липидах, это

сказывается на К. Наличие только одной –ОН группы

снижает К ( в 40 раз.

Поэтому гексанол диффундирует гораздо быстрее,

чем монитол.

В отношении воды было сделано предположение: она дополнительно

диффундирует через поры мембраны. Это было доказано экспериментально: если

брать синтетическую мембрану, но состоящую только из липидов, вода проходит

через нее ( еще одни механизм, связанный с динамическими свойствами

липидов. Так как во время этих динамических движений образуются дефекты и

очень подвижные молекулы воды успевают протикнуть через них через мембрану.

Кинетика такого транспорта характеризует

графическую зависимость скорости поступления

через мембрану от концентрации вещества вне

клетки. Эта прямая отражает кинетику без

Страницы: 1, 2, 3, 4, 5