реферат скачать
 
Главная | Карта сайта
реферат скачать
РАЗДЕЛЫ

реферат скачать
ПАРТНЕРЫ

реферат скачать
АЛФАВИТ
... А Б В Г Д Е Ж З И К Л М Н О П Р С Т У Ф Х Ц Ч Ш Щ Э Ю Я

реферат скачать
ПОИСК
Введите фамилию автора:


Биологическая характеристика возбудителей вирусных трансфузионных гепатитов

Биологическая характеристика возбудителей вирусных трансфузионных гепатитов

Министерство образования и науки Украины

Одесский Национальный Университет им. И. И. Мечникова

Биологический факультет

Кафедра микробиологии, вирусологии и иммунологии

“Биологическая характеристика возбудителей вирусных трансфузионных

гепатитов”

Курсовая работа

студента IV курса

заочного отделения

Богуша Андрея Николаевича

Научный руководитель

Доцент Панченко Николай Никитович

ОДЕССА – 2003

Содержание

Введение………………………………………………………………………...3

1. Обзор литературы…………………………………...…………....…………5

1. Историческая справка………………...………………………….…….—

2. Вирус гепатита В………………………………………………………..6

1. Формы HBV, встречающиеся в крови……..…………………………--

2. Структура HBsAg………………………………………………………7

3. Структура вирусных нуклеокапсидов ………………………………..8

1. Природа HBeAg ……...……………………………………………9

2. Роль HBxAg……………………………………………………….10

4. Физическая и генетическая структура вирусной РНК………………--

5. Механизм репликации вирусов……………………………………...11

6. Чувствительность HBV к физико – химическим факторам………..12

3. Вирус гепатита D……………………………...……………………...13

1. Пути передачи HDV…………………………………………………..—

4. Вирус гепатита С……………………………………………………...15

1. Генетическая неоднородность HCV. ……………………………….—

2. Эпидемиология HCV…………………………………………………16

3. Чувствительность HCV к внешним факторам……………………...18

5. Вирус гепатита G……………………………………………………...19

1. Эпидемиология HGV………………………..………………………..20

6. Вирус гепатита TTV…………………...……………………………...21

1. Систематизация гепатита TTV………………………………….…...22

2. Алиментарное заражение TTV…………………..…………………..—

3. Взаимосвязь гепатита TTV с географическим регионом……….....—

4. Эпидемиология TTV………………………………………………….23

5. Роль гепатита TTV в развитии гепатотропной инфекции…...……..24

Заключение…………………………………………………………………..25

Список литературы………………………………………………………….26

Введение

Вирусные гепатиты составляют большую группу инфекционных заболеваний

человека, характеризующихся симптомами общей интоксикации и

преимущественным поражением печени. Заболевания имеют сходную клиническую

картину, но различаются этиологией, эпидемиологией, патогенезом и исходами.

К возбудителям вирусных гепатитов относят вирусы различных таксономических

групп; всех их отличает способность преимущественно вызывать специфические

поражения клеток печени. В настоящее время выделяют восемь типов

возбудителей вирусного гепатита, которые с учетом эпидемиологических

особенностей можно условно отнести к двум категориям. Вирусные гепатиты с

парентеральными (кровяно - контактым) механизмом передачи (гепатиты B, C,

D, G и ТТV) и гепатиты с энтеральным (фекально - оральным) механизмом

передачи (гепатиты А, Е и предположительно, F), передаются пищевым, водным

и контактным путями. Но мнению экспертов ВОЗ наибольшую опасность

представляют гепатиты с парентеральным механизмом передачи, которые чаще

вызывают хронические процессы в печени. Среди разнообразных этиологических

факторов хронического гепатита ведущее значение имеют вирусы В, С и D.

Исследованиями, проведенными в 1994 году Ивашкиным В. Т., установлено, что

64 % больных хронические заболевания печени и 60,8 % циррозов явились

прямым следствием предшествующего инфицирования вирусами гепатитов В и С.

Хронический процесс может развиться после любого известного клинического

варианта острых вирусных гепатитов, однако ведущее значение в формировании

хронической инфекции принадлежит безжелтушным, бессимптомным, инапаратным

формам и носительству вирусов В и С. Предрасполагают к формированию

хронического гепатита алкоголизм, злоупотребление некоторыми лекарствами,

неполноценное питание [7,10].

В настоящее время, как никогда раньше стоит проблема посттрансфузионных

гепатитов и Службы крови. Существенное снижение качества жизни в Украине,

ослабление государственной поддержки донорства и работы с населением

привели к сокращению числа доноров и к устойчивой тенденции в сторону

увеличения платных добровольцев, а также к общему увеличению возраста

доноров и к практике найма доноров, выдаваемых за родственников. Следствием

данной ситуации является то, что сегодня ни один человек во время

серьезного хирургического вмешательства не застрахован от заражения

гепатитом. Выходом из подобной проблемы может служить: разработка новых,

более эффективных и доступных методов серодиагностики, усовершенствование

прежних и создание новых генетически модифицированных вакцинных препаратов

и, конечно же, абсолютно противоположный подход к донорству.

Учитывая всю изложенную выше информацию, данную тему считаю актуальной

и заслуживающей дальнейшего развития.

Целью настоящей работы было ознакомление с данными отечественных и

зарубежных авторов о биологических свойствах, механизмах патогенеза вирусов

– возбудителей парентеральных гепатитов.

1. Обзор литературы

1. Историческая справка

С. П. Боткин в 1888 г. впервые высказал предположение об инфекционной

природе «катаральной желтухи» человека. Вирусная природа болезни была

доказана в 1937 г. в США Дж. Финделем и Ф. Мак Коллюмом. Это открытие

подтвердили П. Г. Сергеев и Е. Тареев, в 1940 г. при изучении желтух у

привитых против лихорадки Паппатачи. В 1965 г. В. Блюмберг выделил так

называемый «австралийский антиген», оказавшийся поверхностным антигеном

вируса гепатита В (HBsAq), а в 1970 г. – Д. Дейн выявил вирус гепатита В в

крови и клетках печени. В 1973 г. С Фейнстоуну в фекалиях больного удалось

идентифицировать возбудитель гепатита А. В 1977 г. М. Ризетто открыл вирус

– паразит D (дельта – вирус), вызывающий дельта инфекцию только при наличии

у больного HBsAq.

В конце 80-х годов группе американских специалистов удалось выделить и

идентифицировать геном вируса С и в 1989 г. разработать тест-систему ИФА.

На вирус гепатита Е первым в 1980 г. обратил внимание М. Гуро, а в 1982 г.

С. С. Балаян, обладавший напряженным иммунитетом к ВГА заразил себя

материалом, полученным от девяти больных повторно заболевших вирусным

гепатитом (первый гепатит у них был связан с ВГА), и заболел. Так,

экспериментально было доказано существование этиологически самостоятельного

возбудителя, который окончательно был идентифицирован в 1987 г. Вирус

гепатита G был выделен в 1995 г. научной группой фирмы “Abbot” от больного

хроническим гепатитом С. Последним вирусом, получившим научную

классификацию на сегодняшний день, является возбудитель гепатита ТТ,

который в 1997 г. обнаружили японские исследователи [10].

Вирус гепатита F сейчас является предметом дискуссий и споров между

учеными.

2. Вирус гепатита В.

HBV распространен по всему миру. Является самым распространенным

началом хронических заболеваний печени, в том числе гепатоцеллюмерной

карциномы у человека[ 4 ].

Открытию HBV предшествовало выявление в 1965 году в крови

австралийского аборигена так называемого австралийского антигена,

представляющего собой поверхностные капсидные белки вируса гепатита В

человека. Позднейшими исследованиями были установлены аналогичные вирусы и

у животных (сурков, земляных и лесных белок, кенгуру, цапель, пекинских

уток, гремучих змей). HBV в последние годы отнесен к семейству –

Hepadnaviridae [ 6 ].

1.2.1 Формы HBV, встречающиеся в крови.

Поверхностный антиген HBV (HBsAg) был открыт в 1963 году при

исследовании полиморфизма сывороточных белков человека [ 10,15 ].

Первыми корпускулярными формами HBsAg, которые установила электронная

микроскопия были небольшие сферические частицы, диаметром от 16 до 25 нм,

названные в дальнейшем (22 нм) частицами, а также нитевидные и

палочкообразные частицы, имеющие 22 нм в ширину и несколько сотен

нанометров в длину. Они состоят из белка, углеводов и липидов, не содержат

ДНК и сейчас рассматриваются как неполная форма оболочечного белка вируса

[1 ].

В 1970 году Дейн описал большую более сложную частицу, содержащую

HBsAg. Она представляет собой полный вирион HBV, диаметром 42 нм, имеет

липидосодержащий наружный слой (оболочку) толщиной 7 нм и электроноплотную

сферическую внутреннюю сердцевину (нуклеокапсид) диаметром 28 нм.

Поверхность вириона имеет антигенные детерминанты HBsAg, общие с неполными

формами вируса. Наружная оболочка удаляется обработкой неионными

детергенами, такими как NP-40, после чего остаются сердцевинные частицы,

содержащие HBсAg, химически отличающиеся от HBsAg. Сердцевина вируса

содержит также вирусную ДНК с ковалентно присоединенным полипептидом,

протеинкиназу и третий антиген, ассоциированный с инфекционностью HBV –

(HBeAg), присутствующий в скрытой форме [5,15].

Введение шимпанзе 1 мл некоторых неразведенных HBsAg реактивных

сывороток, полученных от больных с хроническими HBV, после антивирусной

терапии, не вызвало у них инфекции. Вывод: у таких больных HBsAg

циркулирует только в составе неполных частиц, но не в составе полных

вирионов. Однако, сыворотки некоторых больных были заразны в разведениях 10-

7 [ 2,12 ].

1.2.2 Структура HBsAg.

Это сложный антигенный комплекс. В этих частицах может определятся пять

антигенных детерминант.

Группоспецифическая детерминанта а – общая для всех препаратов HBsAg.

Еще есть две пары подтиповых детерминант: d или y, или w, или r –

взаимоисключающие друг друга. Описаны антигенная гетерогенность w –

детерминант и добавочные детерминанты, такие как q или x или g [15,7].

Идентифицировано 8 подтипов HBsAg: ayw1, ayw2, ayw3, ayw4, ayr, adw2, adw4,

adr [11]. Необычные комбинации подтипов детерминант выделяются на Дальнем

Востоке. Наблюдается неравномерное географическое распределение подтипов

HBsAg среди зараженного населения. В Северной Америке, Европе и Африке

преобладают подтипы adw и ayw, а в Юго – Восточной Азии и на Дальнем

Востоке – подтип adr на ряду с adw и ayw. Подтип ayr менее распространен в

мире, но он идентифицирован у нескольких изолированных групп населения

Океании [15,3].

Доказано, что вирус – специфическим антигеном является HBsAg,

иммунизация которым обеспечивает защиту от HBV.

Для определения х/с HBsAg сферические нитевидные частицы можно очистить

гельфильтарцией, скоростным зональным центрифугированием в градиенте

плотности CsCl. При центрифугировании в градиенте плотности CsCl эти

частицы отделяются от вируса благодаря различиям в их плавучих плотностях.

Плавучая плотность (22 нм) – сферических частиц подтипов adw и ayw равна

1,20 г/см3 в CsCl и 1,17 г/см3 в сахарозе. Это свидетельствует о

значительном содержании в них липидов приблизительно 30%. Более высокая

плавучая плотность полных вирионов приблизительно 1,28 г/см3 для вирионов с

нуклеокапсидом, содержащем ДНК и 1,24 г/см3 для вирионов с пустой

сердцевиной, отражает вклад нуклеиновой кислоты в нуклеокапсиды. Липидный

анализ дает смесь липидов[5,7,3,15].

Средняя молекулярная масса HBsAg / adw равна 3,7*106 - 4,6*106. при

изоэлектрическом фокусировании препаратов (22 нм) – частиц HBsAg выявляется

несколько популяций с различными значениями pI от 3,65 до 5,3. Средний

коэффициент сидиментации для HBsAg варьирует от 39 S до 54 S. Определение

среднего удельного коэффициента экстинкции 1% р-ра очищенного белка HBsAg

при 280 нм лежит в пределах от 37,3 до 60,0 [13].

Методом электорофореза в ДСН – ПААГ в очищенных препаратах (22 нм) –

частиц HBsAg adw - , ayw – и adr – подтипов выделено 7 или более

полипептидов с молекулярной массой от 25000 до 100000. В связи с тем, что

наружная оболочка вирионов HBV содержит HBsAg и липиды (частично взятые у

клетки хозяина), предположили, что она химически похожа на 22 нм частицу

HBsAg [5,7,15].

1.2.3 Структура вирусных нуклеокапсидов.

Сердцевина вириона несет сердцевинный антиген HBV (HBcAg), который

обнаружен в крови, как внутренний компонент вириона. Он иногда определяется

в сыворотке в ранний период виремии до появления антител к HBсAg.

Исследования показали, что значительная фракция HBсAg – частиц, выделенных

из вирионов и меньшая фракция их выделенная из зараженной печени, имеет

высокую плавучую плотность в CsCl (1,38 г/см3) и содержит ДНК и ДНК -

полимеразную активность [1,13,15]. Установлено, что высокоочищенные

сердцевины, полученные из вирионов и HBсAg – частицы, выделенные из печени,

содержат несколько уникальных полипептидов от 19 к до 38 к. Полипептид 19 к

может реагировать с антителами е – антигену HBV (анти - HBe) [14,15].

1.2.3.1 Природа HBeAg

Идентифицирован в 1972 году; физически и антигенно отличается от HBsAg

и HBсAg, трудно поддается очистке, представляет собой комплекс антигенов. В

огаровом геле дается до 3 линий преципитации: е1, е2, е3. в сыворотках

больных HBV определяются как связывающийся с (IgG) HBсAg с молекулярной

массой 300 к, так и меньший «свободный» HBeAg с молекулярной массой 30 – 35

к. Свободная форма способна к диссоциации на меньшие полипептиды с

молекулярной массой 15,5 к. Особо следует отметить, выраженную корреляцию

присутствия HBeAg в сыворотке больных с высокой концентрацией физических

вирусных частиц. Есть данные, что HBeAg и вирионы продуцируются вместе во

время инфекции, кроме этого известно, что HBeAg является компонентом

вириона, из которой активно высвобождается при разрушении ее детергентом

[5,15].

Информация об HBeAg заложена в С – гене. Многочисленные факты,

полученные при изучении HBV позволили сделать вывод о связи HBeAg с

инфекционностью и наличием вируса. Оказалось, что инфекционность сывороток

крови с HBeAg в миллион раз выше, чем с анти – Hbe. Однако, эта связь не

абсолютна. Выявлены мутантные формы HBV, при которых блокируется синтез

HBeAg. При этом, не смотря на наличие анти – Hbe в сыворотке крови удается

тестировать ДНК – HBV. Исследования последних лет, связанные с изучением

мутантных форм HBV, позволили по-новому взглянуть на значение HBeAg в

патогенезе HBV. Предполагают, что у матерей носителей HBV HBeAg, проходя

через плаценту, вызывает развитие иммунной толерантности, приводящей к

прогрессированию в хронический гепатит [7,15].

1.2.3.2 Роль HBxAg

Считают, что х – антиген является как регуляторным белком, усиливающим

синтез вирусных белков, так и возможно, белком, включенным в структуру HBV.

HBxAg играет особую роль в развитии первичной гепатоклеточной карциномы. Р

– ген, ДНК – полимеразы - фермент, информация о котором заложена в ДНК HBV.

Он обладает ферментативной активностью как РНК – зависимая ДНК – полимераза

и необходим для достройки внутренней короткой цепи ДНК HBV в процессе ее

репликации [13,15].

1.2.4 Физическая и генетическая структура вирусной ДНК.

Вирионы HBV имеют маленькую кольцевую, частично двухцепочечную молекулу

ДНК. Одноцепочечные участки варьируют по длине, составляя в различных

молекулах от ( 15 до 60%. Таким образом, ДНК состоит из длинной цепи L

постоянной длины (( 3220 оснований) во всех молекулах и короткой (S),

которая в различных молекулах варьирует по длине от 1700 до 2800 оснований.

ДНК полимеразы достраивает одноцепочечные участки вирусной ДНК до полностью

двухцепочечной молекулы, содержащей приблизительно 3200 bр. Синтез ДНК

начинается на 3' конце короткой цепи, которая в разных молекулах находится

на различных участках в пределах специфической области ДНК и заканчивается

по достижении 5' конца короткой цепи, расположенного в строго определенной

месте. Длинная цепь не является замкнутой окружностью: в точке,

расположенной приблизительно на расстоянии 300 bp от 5' конца короткой

цепи, существует разрыв. С помощью нагревания при определенных условиях,

которая вызывает избирательную денатурацию 300 – нуклеотидной области между

5' концом короткой цепи и разрывом длинной цепи, кольцевая ДНК может быть

превращена в линейную форму с одноцепочечными липкими концами. Линейная

форма может быть вновь переведена в кольцевую путем реассоциации

комплементарных одноцепочечных концов. По видимому, 5' концы обеих, как

длиной, так и короткой цепей ДНК HBV блокированы таким образом, что

предотвращено их фосфорилирование полинуклеотиназой. Химическая природа

цепи ДНК, выделенной из вирионов ковалентно присоединена к полипептиду, что

предотвращает ее фосфорилирование [7,15].

1.2.5 Механизм репликации вирусов.

После проникновения вируса в клетки печени в клеточных ядрах

формируются замкнутые кольцевые вирусные ДНК, состоящие из 3200 bp. Они

могут функционировать как матрицы для синтеза вирусной мРНК и синтеза плюс

РНК полной длины, новосинтезированная вирусная ДНК – полимераза и белок –

затравка для синтеза минус – цепи ДНК собираются в комплекс с мажорным

структурным полипептидом в сердцевины вируса и образуют сердцевину или

нуклеокапсид вируса. Затем внутри нуклеокапсида синтезируется минус – цепь

вирусной ДНК. В этом процессе используется белковая затравка и РНК

матрица, которая по мере синтеза ДНК деградирует под действием РНК азы Н.

на матрице минус – цепи ДНК кольцевой конформации синтезируется плюс – цепь

вирусной ДНК. Затем частицы сердцевины собираются в полные вирионы с HBcAg

и липидосодержащими оболочками клеточной мембраны. В случае HBV

формирование вируса и выделение его из клетки могут, происходить, очевидно,

на любой ступени после сборки сердцевины, так как вирионы (частицы Дейна)

содержащие молекулы гибридов ДНК – РНК, а также частично одноцепочечные

кольцевые ДНК обнаруживаются в крови. Эндогенное ДНК полимеразы в вирионах

катализируют включение нуклеотидов в минус – цепи ДНК гибридов РНК – ДНК и

в плюс - цепи ДНК частично одноцепочечных молекул [15].

1.2.6 Чувствительность HBV к физико – химическим факторам.

Характеризуется значительной устойчивостью, при t = -20Со сохраняется

до 20 лет, не инактивируется при замораживании – оттаивании, сохраняется

при 56 Со около суток, а при 60 Со – 30 минут. Антиген устойчив к

воздействию протеолитических ферментов и органических растворителей. Под

действием эфира, хлороформа, 1,5% формалина, 2% р-ра фенола не

инактивируется несколько часов. При t = 100 Со надо несколько минут, чтобы

убить вирус. В сыворотке сохраняется 6 месяцев при 30 – 32 Со. после

высушивания вирус сохраняет жизнеспособность при 25 Со около недели. При

процедуре фракционирования плазмы по Кону, большая часть HBV, HBeAg, ДНК –

полимеразы сохраняется в первой фракции (фибриноген, фактор - восемь) или

во фракции три (протромбиновый комплекс), тогда как большая часть HBsAg

перемещается во фракцию четыре (плазматических белков), а меньшее

количество во фракции три и пять (альбумин). После прогревания HBV до 60Со

в течении 4 часов вирус не инактивируется, 10 часов при 60 Со ликвидирует

его. При 98 Со инфекционность сыворотки частично устраняется через 1 минуту

или полностью через 20 минут. Сухой жар 160 Со разрушает инфекционность

через час. В другой серии опытов HBV в течении 10 минут обрабатывали при 20

Со одним из пяти дезинфицирующих препаратов (гепатохлоридом натрия + 500 мг

свободного активного хлора на 1 литр; Cidex СХ – 250 + 2% водный р-р

Страницы: 1, 2


реферат скачать
НОВОСТИ реферат скачать
реферат скачать
ВХОД реферат скачать
Логин:
Пароль:
регистрация
забыли пароль?

реферат скачать    
реферат скачать
ТЕГИ реферат скачать

Рефераты бесплатно, курсовые, дипломы, научные работы, реферат бесплатно, сочинения, курсовые работы, реферат, доклады, рефераты, рефераты скачать, рефераты на тему и многое другое.


Copyright © 2012 г.
При использовании материалов - ссылка на сайт обязательна.