Вредные частицы

исключения вирусов синтезируются в цитоплазме. Заражение клеток вирусами в

принципе может привести к двум последствиям. Зараженная клетка может либо

погибнуть, образовав при этом большое количество вируса (литический тип

взаимодействия вирусов с клетками), либо продолжать жить и делиться,

синтезируя небольшие количества вируса. Культуры размножающихся клеток,

продуцирующих вирус, называют персистентно инфицированными. Почти любой

вирус животных при соответствующих условиях может вызвать персистентную

инфекцию. Более того, многие вирусы лизируют клетки очень редко, и обычно в

зараженных клетках устанавливается состояние устойчивого равновесия -

образуется персистентно инфицированная культура клеток.

Установлено, что при успешной литической инфекции в зараженных клетках

происходит пять четко отличающихся друг от друга событий, реализуемых

функционально активными вирус-специфическими белками. В ходе одиночного

цикла репродукции вируса эти события развиваются либо параллельно, либо

последовательно. Их временная последовательность определяется

специфическими свойствами каждого вируса. Это следующие события: 1)

подавление вирусом ряда клеточных функций; 2) синтез вирусных м РНК; 3)

репликация вирусного генома; 4) морфогенез вирионов; 5) освобождение

вирионов из клетки.

Согласно правилам спаривания оснований по Уотсону и Крику, для каждой

данной молекулы РНК можно записать комплементарную ей нуклеотидную

последовательность. Для удобства классификации вирусов вирусную м РНК

условно обозначают как «плюс»-цепь, а комплементарную ей

последовательность, как «минус»-цепь. Исходя из структурной взаимосвязи

между нуклеиновой кислотой вириона и его м РНК, все вирусы животных можно

разделить на шесть классов. Конечно, эту классификацию можно применить

также и к бактериофагам, и к вирусам насекомых, и растений, но в

настоящее время разумнее всего ограничить ее применение вирусами животных.

К классу I относятся вирусы, содержащие двухцепочечную ДНК, например вирус

осповакцины

м РНК этих вирусов синтезируется таким же образом, как и клеточные м РНК,

геном вируса - двухцепочечная ДНК - служит матрицей для синтеза м РНК.

Класс II включает вирусы, содержащие одноцепочечную ДНК. Их м РНК по

нуклеотидному составу, вероятно, полностью гомологична ДНК вириона. Поэтому

м РНК должны транскрибироваться с «минус»- цепи ДНК, входящей в состав

репликативного промежуточного комплекса-вируса. К остальным классам

относятся вирусы, у которых геном служит РНК. Класс III включает вирусы,

содержащие двухцепочечную РНК, например реовирусы. Эта РНК служит

мартицей для асимметричного синтеза вирусных м РНК. Оказалось, что у всех

до сих пор обнаруженных вирусов класса III геном сегментирован, т.е.

состоит из множества хромосом, каждая из которых кодирует один полипептид.

Вирусы, относящиеся к классу IV, содержат «плюс»-цепи РНК. Геном этих

вирусов имеет ту же полярность, что и их м РНК. Вирусы данного класса

делятся на два подкласса. У вирусов подкласса Ivа, типичным представителем

которых является вирус полиомиелита, все белки синтезируются при

трансляции одной-единственной молекулы м РНК. Образующийся при этом

полипротеин расщепления затем протеолитическими ферментами с образованием

функционально активных белков. Все м РНК этих вирусов имеют ту же длину,

что и РНК-геном. Вирусы подкласса Ivв называют также тогавирусами. Они

синтезируют в клетке по меньшей мере два вида вирусных м РНК: м РНК одного

вида имеет ту же длину, что и РНК вириона, а м РНК второго вида

представляет собой фрагмент РНК вириона.

Вирусы класса V называют также «минус» - РНК-вирусами. По нуклеотидной

последовательности м РНК этих вирусов комплементарна РНК вирионов.

Следовательно, вирион содержит матрицу для синтеза м РНК, но не для синтеза

белков. Различают два подкласса вирусов класса V. Геном вирусов подкласса

Vа представляет собой одну молекулу РНК, с которой транскрибируется целый

ряд м РНК, причем все до сих пор изученные м РНК этих вирусов

моноцистронные. Вирусы подкласса Vв имеют сегментированный геном. Каждый

из сегментов генома служит матрицей , с которой транскрибируется лишь один

вид молекул м РНК. Один из этих м РНК кодируют мноцистроенные, а другие

- полицистроенные полипротеины. Вирусы, относящиеся к классу VI, называют

также ретровирусами. Это самые необычные из всех известных РНК-содержащих

вирусов, ибо при транскрибировании их РНК синтезируется не РНК, как

обычно, а ДНК, которая в свою очередь служит матрицей для синтеза м РНК.

Следовательно м РНК этих вирусов и РНК их вирионов не отличаются по

полярности друг от друга, а некоторые из них идентичны и по длине. Из

удивительных свойств этих генетических систем вытекает не мало

замечательных следствий.

Плюс - РНК-вирусы:

пикоркавирусы (класс IV а)

Вирусы этого подкласса, из которых наиболее интенсивно изучался вирус

полиомиелита, известны под общим названием «пикоркавирусы». К их числу

относятся также вирус менго, вирус энцефаломиокардита (пикоркавирусы

мышей), риновирусы (вирусы, вызывающие у человека один из видов острых

респираторных заболеваний, - так называемую простуду_ и вирус ящура.

Тогавирусы (класс IV в)

К тогавирусам относятся все плюс - РНК-вирусы, в которых образуются м РНК

двух типов, различающиеся по своим размерам. Название «тогавирусы»

отражает особенности внешней оболочки их вирионов. Синтез этой оболочки

рассматривается в другом разделе, а здесь мы обсудим только механизмы

синтеза РНК и белков, используемые вирусами данного класса. Прежде чем

перейти к рассмотрению молекулярной биологии тогавирусов, интересно

вспомнить, как были обнаружены вирусы этой группы. Эпидемиологи установили,

что многие вирусы, вызывающие заболевания позвоночных животных,

переносятся клещами или комарами.

Тогавирусы, патогенные для человека, обычно эндемичны для различных видов

животных и передаются человеку лишь через укус какого-либо членистоногого

переносчика. Вирусы этой группы были названы арбовирусами (означает

«переносимый членистоногими»). Впоследствии, однако, стало ясно, что под

этим названием объединены вирусы, резко различающиеся по своим

биохимическим свойствам. Общим у них обычно является способность

размножаться как в клетках насекомого-переносчика, так и в клетках тех или

иных позвоночных животных. Основная часть арбовирусов по своим

биохимическим свойствам относится к тогавирусам. Серологически тогавирусы

делятся на две группы (А и В), которые в настоящее время называются

альфавирусами и флавирусами соответственно. К числу тогавирусов относятся

по меньшей мере два вируса, не являющиеся арбовирусами, - вирус краснухи и

вирус, повышающий в крови зараженного им животного содержание

лактатдегидрогеназы..

Вирусы, содержащие минус - цепь РНК (класс V):

вирус везикулярного стоматита

Минус - РНК-вирусы подразделяются на три главные морфологические категории:

рабдовирусы, парамиксовирусы и ортомиксовирусы. В плане биохимической

стратегии рабдовирусы и парамиксовирусы очень близки друг к другу и

составляют большую часть хорошо изученных вирусов класса Vа. В данном

разделе основное внимание будет уделено только одному рабдовирусу - вирусу

везикулярного стоматита (ВВС), так как он изучен наиболее детально. Хотя

ВВС и патогенен для крупного рогатого скота, вызываемые им заболевания

протекают легко и не приводят к серьезным экономическим убыткам. В

культурах клеток ВВС размножается быстро и урожай его достигает высоких

титров. Зараженные им клетки погибают. При заражении чувствительных клеток

другими рабдовирусами или парамиксивирусами обычо развивается

персистентная инфекция, не приводящая к гибели клеток. Поэтому такие

системы вирус-клетка намного труднее поддаются изучению. Ортомиксовирусы,

из которых наиболее известными являются вирусы гриппа человека, имеют

сегментированным геном, состоящий из ряда отдельных минус-цепей РНК.

Вирион ВВС, подобно вирионам всех других тогавирусов, покрыт внешней

оболочкой, но в отличие от них имеет характерную форму пули. Само название

«рабдовирусы» происходит от греческого корня, означающего «палочка», и

обусловлено асимметричностью этих частиц. Пулеобразная форма вириона

отражает форму его нуклеокапсида, предоставляющего собой свернутую в

цилиндр спираль и содержащего одну молекулу РНК с мол. Весом 4.106. Эта РНК

не обладает ни одним из характерных признаков м РНК вирусов эукариот: на ее

3-м конце нет последовательности poly (А), а на 5-м конце нет «шапочки».

Кроме того, она не обладает инфекционностью. Ее функция состоит в том, что

она служит мартицей для синтеза вирусных м РНК и, следовательно, является

минус - цепью РНК. Нуклеокапсид ВВС представляет собой очень стабильную

структуру, и находящаяся в нем РНК полностью защищена от действия

рибонуклеазы. Нуклеокапсид этого вируса инфекционен, но его удельная

инфекционность очень мала. Вирион ВВС содержит пять различных белков, и

других вирусных белков в зараженных клетках не обнаруживается. Белок, на

долю которого приходится основная масса белков нуклеокапсида и вириона в

целом, называется белком N. Нуклеокапсид содержит небольшое количество еще

двух белков, называемых белками L и № 9. Они принимают участие в синтезе

вирусной РНК. Пространство между нуклеокапсидом и липопротеидной оболочкой

вириона заполнено молекулами еще одного вирусного белка, называемого

белком М. Наконец , снаружи от двойного слоя липидов оболочки находится

белок G, образующий упорядоченную систему расположенных на поверхности

вириона шипов.

В отличие от рабдовирусов парамиксовирусы не имеют пулеобразной формы, а

представляют собой неправильные сферы, что отражает менее упорядоченную

укладку их нуклеокапсидов.

Внешние оболочки вирусов

Общим свойством тогавирусов, минус-РНК-вирусов и ретровирусов является

наличие у них липопротеидной внешней оболочки, окружающей

рибонуклеопротеидную сердцевину. Механизм образования такой оболочки у всех

вирусов один и тот же: рибонуклеопротеид связывается с внутренней

поверхностью измененного участка плазматической мембраны клетки и при

выходе из клетки окружается этой измененной мембраной. Такой процесс

называется почкованием, а образующаяся вирусная частица в тот период, когда

она еще связана с плазматической мембраной, носит название почки. На

электронных микрофотографиях ультратонких срезов клеток эти почки очень

хорошо видны, ибо они представляют собой характерно измененные оболочки

плазматической мембраны.

Строение вириона

В состав вирионов, имеющих внешнюю оболочку, входят три главных класса

структурных белков: глинопротеиды, белки матрикса и белки нуклеокапсида.

Макроструктура вириона определяется свойствами поверхности двойного слоя

липидов, окружающего нуклеокапсид. Наружная поверхность двойного

липидного слоя покрыта гликопротеидом, а внутренняя контактирует с белками

матрикса или нуклеокапсида. Все липиды, содержащиеся во внешней оболочке

вириона, имеют клеточное происхождение, так как не обнаружено какого-либо

вирус-специфического обмена липидов. По своему составу липиды вириона очень

сходны с липидами плазматической мембраны клетки-хозяина: в их число

входят холестерин, гликолипиды и фосфолипиды. Клетки различных видов

существенно различаются между собой по липидным компонентам плазматических

мембран. Поэтому липидный состав вируса, формирующегося в данной клетке,

точно соответствует липидному составу ее плазматической мембраны.

Гликопротеиды, содержащиеся в оболочках различных вирусов, обладают как

специфическими свойствами, так и свойствами, общими для всех вирусных

гликопротеидов. Все они находятся на внешней поверхности вириона и могут

быть удалены под воздействием протеаз. Поскольку протеазы отщепляют от

интактных вирионов только гликопротеиды, ясно, что наружу из двойного слоя

липидов выступают лишь эти молекулы вирусных белков. Следует отметить, что

протеазы удаляют лишь часть молекулы гликопротеида. Другая ее часть -

«ножка», состоящая из высокогидрафобного полипептиада - по-видимому,

погружена в двойной липидный слой и недоступна для протеазы.

Сборка вириона

На первой стадии формирования вириона происходит синтез его индивидуальных

белков. Белки каждого из трех классов синтезируются, по-видимому,

независимо друг от друга и часто на отдельных м РНК.

Гликопротеиды образуются на связанных с мембранами м РНК и в свободном

состоянии в клетках никогда не встречаются. Молекулы белка «созревают» по

мере их передвижения из шероховатого эндоплазматического ретикулума в

гладкий, а затем, возможно, в аппарат Гольджи и, наконец, в плазматическую

мембрану клетки. Присоединение углеводов к белкам происходит при

перемещении последних по внутриклеточным мембранам. В конце концов они

выходят на поверхность клетки, где, вероятно, свободно плавают в жидком

двойном липидном слое плазматической мембраны.

Вирусы, содержащие двухцепочечную РНК (класс III)

Вирусы данного класса были обнаружены у плесеней, высший растений,

насекомых и позвоночных животных. Ни один из этих вирусов не содержит

липидов. Их капсиды состоят из двух слоев - внутреннего (сердцевины) и

наружного, образующего оболочку вокруг сердцевины. В сердцевине находится

множество сегментов двухцепочечной РНК и варьирующее число небольших

олигонуклеотидов, не имеющих, по-видимому, никаких генетических функций.

Наиболее тщательно изучены реовирусы человека, которые, как правило, не

вызывают каких-либо явных патологических симптомов. Исключение составляют,

по-видимому, реовирусоподобные агенты, выделяемые при гастроэнтеритах у

детей. Тем не менее эти вирусы часто выделяют из организма человека,

причем в лабораторных условиях они хорошо размножаются. Некоторые данные

получены также об отдельных вирусах растений и насекомых, содержащих

двухцепочечную РНК.

Размножение вирусов животных.

ДНК-содержащие вирусы и ретровирусы.

Поскольку в нормальных клетках нет никаких эквивалентов генетических

систем РНК-содержащих вирусов, такие вирусы способны размножаться лишь в

том случае, если они синтезируют ферменты, необходимые для транскрипции и

репликации их генома. В случае ДНК-содержащих вирусов, напротив, синтез их

м РНК происходит так же, как и м РНК нормальных клеток. Репликация их

генома и генома клетки формально также весьма сходны. Более того,

транскрипция и репликация ДНК большинства вирусов, так же как и клеточной

ДНК происходит в ядре. Сходство основных процессов у клеток и ДНК-вирусов

наводит на мысль, что для размножения последних нет никакой необходимости

в индукции каких-то особых ферментов, отсутствующих в незараженной клетке.

Отсюда следует, что для размножения ДНК-вируса достаточно присутствия

белков его капсида, так что геном такого вируса вполне может состоять

только из генов, кодирующих его капсид. Следует, однако, подчеркнуть, что,

хотя такие простые ДНК-вирусы действительно существуют, жизненный цикл

большинства ДНК-вирусов значительно сложнее. Различные ДНК-вирусы очень

сильно отличаются друг от друга как по величине, так и по сложности их

строения. Молекулярный вес ДНК наименьших из них составляет всего 1,5х106

дальтон, а самых крупных - в 100 раз больше. По мере увеличения вирусных

геномов они становятся все сложнее и сложнее. Возрастает общее число генов

и усложняется механизм репликации ДНК.

Поскольку мелкие ДНК-вирусы способны к интенсивному размножению,

представляется удивительным сам факт возникновения крупных ДНК-вирусов.

Одно из преимуществ, которое может получить вирус при увеличении его генома

- это уменьшение зависимости от клетки.

Парвовирусы

Самыми простыми из всех известных вирусов, вероятно, являются парвовирусы.

Их геном представлен одноцепочечной ДНК с мол. Весом всего 1,5х106 дальтон.

Однако для единственного кодируемого этим вирусом продукта - белка его

капсида - даже эта малая молекула слишком велика. Размножение этого

крошечного паразита, по-видимому, действительно полностью зависит от

соответствующих систем клетки-хозяина. Существует два основных класса

парвовирусов - автономные и дефектные. Все до сих пор известные автономные

парвовирусы - это вирусы грызунов; для транскрипции, репликации и других

функций эти вирусы используют соответствующие ферменты клетки-хозяина.

Дефектные парвовирусы размножаются лишь в клетках, которые заражены

одновременно аденовирусом, выполняющим некоторые необходимые функции. До

сих пор не найдено нормальных клеток, в которых могли бы размножаться

дефектные парвовирусы. В клетках, находящихся в стационарной фазе,

автономные парвовирусы не размножаются, они размножаются лишь в клетках ДНК

которых уже реплицируется, т.е. в клетках, находящихся в S-фазе клеточного

цикла.

Это ограничение касается типа клеток, поражаемых данными вирусами.

Парвовирусы вызывают аномалии развития у эмбрионов и дефекты растущих

тканей у новорожденных. Они вызывают также нарушения функции кишечника,

что, вероятно, является следствием их размножения в быстро делящихся

клетках крипт.

Дефектные парвовирусы размножаются только в клетках, зараженных

аденовирусом - помощником, и не зависят от фазы клеточного цикла. Их

вирусом- помощником могут быть только аденовирусы. Герпесвирусы также

способны выполнять некоторые из необходимых функций вируса - помощника,

однако полные инфекционные частицы парвовирусов в этом случае не

образуются. Именно по этой причине дефектные парвовирусы называют также

«аденоассоциированными» вирусами (ААВ).

Одно из характерных различий между автономными и дефектными парвовирусами

состоит в том, что геном первых представлен уникальной одиночной цепью

ДНК, а геном дефектных парвовирусов - эквимолярными количествами

одноцепочечных комплелянтарных друг другу молекул ДНК. При гибридизации

одноцепочечные молекулы ДНК, выделенные из вирионов ААВ, легко

превращаются в молекулы двухцепочечных ДНК. Вирионы парвовирусов близки

по величине к рибососмам - их диаметр 20 нм. Не содержащие липидов капсиды

этих вирусов состоят из трех полипептидов различной длины. Молекулярный

вес самого большого из них 90000 дальтон. Судя по пептидной карте, малые

полипептиды представляют собой части большого; поэтому полагают, что

вирусная м РНК кодирует только полипептид с мол. весом 90000.

Паповавирусы

Паповавирусы известны лучше других благодаря принадлежащим к этой группе

подробно исследованным онкогенным вирусам - вирусу полиомы и SV40, которые

размножаются лишь в очень узком кругу клеток млекопитающих. Обычно при

изучении онкогенных свойств этих вирусов, имеется в виду их способность

трансформировать клетки in vitro - ими заражают клетки тех видов, которые

они трансформируют, но в которых не размножаются, а следовательно, и не

вызывают их лизис.

В состав группы паповавирусов, кроме вирусов полиомы и SV40, входит ряд

других вирусов. Свое наименование паповавирусы - группа получила от

названий трех вирусов: вируса кроличьей папилломы, вируса полиомы (по) и

вакуолизирующего (ва) обезъянеьего вируса, тип 40 (SV40). У человека эти

вирусы не вызывают заболеваний, хотя SV40 иногда заражает клетки человека.

У людей широко распространены три других паповавируса - вирус JC, ВК и

вирус бородавок. Предполагается, что вирус JC является этиологическим

агентом прогрессирующего дегенеративного заболевания центральной нервной

Страницы: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9