Биотехнология

| | |ран, ожогов, геморроя |

|Nicotiana tabacum |Убихинон- 10 |Важный компонент |

|(табак) | |дыхательной и |

| | |фотосинтетической цепей |

| | |переноса электронов, |

| | |применяемый как витамин и |

| | |в аналитических целях |

|To же |Глутатион |Участник многих |

| | |окислительно-восстановитель|

| | |ных реакций в клетке, |

| | |приравнивается к витамину |

|Morinda citrifolia |Антрахиноны |Сырье для лакокрасочной |

| | |промышленности |

|Coleus blumei |Розмариновая |Жаропонижающее средство, |

| |кислота |проходящее клинические |

| | |испытания |

|Berberis stolonifera |Ятрорризин |Спазмолитическое |

|(барбарис) | |лекарственное средство |

Биодеградация пестицидов. Пестициды обладают мощным, но недостаточно

избирательным действием. Так, гербициды, смываясь дождевыми потоками или

почвенными водами на посевные площади, наносят ущерб сельскохозяйственным

культурам. Помимо этого, некоторые пестициды длительно сохраняются в почве,

что тоже приводит к потерям урожая. Возможны разные подходы к решению

проблемы: 1) усовершенствование технологии применения пестицидов, что не

входит в компетенцию биотехнологии; 2) выведение растений, устойчивых к

пестицидам; биодеградация пестицидов в почве.

К разрушению многих пестицидов способна микрофлора почвы. Методами

генетической инженерии сконструированы штаммы микроорганизмов с повышенной

эффективностью биодеградации ядохимикатов, в частности штамм Pseudomonas

ceparia, разрушающий 2, 4, 5-трихлорфеноксиацетат. Устойчивость того или

иного пестицида в почве меняется при добавлении его в сочетании с другим

пестицидом. Так, устойчивость гербицида хлорпро-фама увеличивается при его

внесении совместно с инсектицидами из группы метилкарбаматов. Оказалось,

что метилкарбаматы ингибируют микробные ферменты, катализирующие гидролиз

хлорпрофама.

Микробная трансформация пестицидов имеет и оборотную сторону. Во-первых,

быстрая деградация пестицидов сводит на нет их полезный эффект. Во-вторых,

в результате микробного превращения могут образоваться продукты, сильно

ядовитые для растений. При использовании гербицида тиобенкарба в Японии

наблюдали подавление роста и развития риса. Установлено, что подавляет не

сам гербицид, а его дехлорированное производное S-бензил-N,N-

диэтилтиокарбамат. Чтобы предотвратить образование такого производного,

тиобенкарб применяют в комбинации с метоксифеном, ингибитором

дехлорирующего фермента микроорганизмов.

Биологическая защита растений от вредителей и патогенов. Из широкого

спектра биологических средств защиты растений ограничимся рассмотрением

средств борьбы с насекомыми-вредителями и патогенными микроорганизмами.

Именно в этих областях имеются наибольшие перспективы.

К традиционным биологическим средствам, направленным против насекомых,

принадлежат хищные насекомые. В последние годы арсенал «оружия»

инсектицидного действия пополнен грибами, бактериями, вирусами, патогенными

для насекомых (энтомо-патогенными). Многие виды насекомых-вредителей (тля,

колорадский жук, яблоневая плодожорка, озимая совка и др.) восприимчивы к

заболеванию, вызываемому грибом Beauveria bussiana. Препарат боверин из

лиофильно высушенных конидий гриба сохраняет энтомопатогенность в течение

года после обработки почвы или растений. Препарат пецилолин из гриба

Poecilomyces fumoso-roseus применяют для борьбы с вредителями кустарников,

например смородины.

Важным источником бактериальных энтомопатогенных препаратов служит Bacillus

thuringiensis. Эти препараты обладают высокой устойчивостью и патогенны для

нескольких сотен видов насекомых-вредителей, в том числе для листогрызущих

насекомых — вредителей яблонь, винограда, капусты, лесных деревьев. Гены,

отвечающие за синтез одного из токсинов В. thuringiensis, были изолированы

и перенесены в растения табака. Необходимо, чтобы такие «энтомопатогенные»

растения не содержали веществ, токсичных для человека и животных.

Вирусные препараты отличаются высокой специфичностью действия, длительным

(до 10—15 лет) сохранением активности, устойчивостью к колебаниям

температуры и влажности. Из многих сотен известных энтомопатогенных вирусов

наибольшее применение находят вирусы ядерного полиэдроза, обладающие

высокой эффективностью действия на насекомых-вредителей. Насекомых

выращивают в искусственных условиях, заражают вирусом, из гомогенатов

погибших насекомых готовят препараты. Применяют отечественные препараты

вирин-ЭКС (против капустной совки), вирин-ЭНШ (против непарного

шелкопряда). В последние годы для культивирования вирусов широко применяю;

культуры клеток насекомых.

Комбинация из нескольких биологических средств нередко действует

на вредителей более эффективно, чем каждый в от дельности. Смертность

соснового шелкопряда резко возрастает, если вирус цитоплазматического

полиэдроза применяют в сочетании с препаратами из Вас. thuringiensis.

Эффективна комбинация биологических и химических средств защиты

растений от насекомых.

Среди новых средств защиты растений — вещества биогенного происхождения,

ингибирующие откладку яиц насекомыми или стимулирующие активность

естественных врагов насекомых вредителей: хищников, паразитов .

Разнообразны средства защиты растений от фитопатогенных микроорганизмов.

1. Антибиотики. Примерами могут служить триходермин и трихотецин,

продуцируемые грибами Trichoderma sp. и Trichotecium roseum. Эти

антибиотики используются для борьбы с корневыми гнилями овощных, зерновых и

технических культур.

2. Фитоалексины, естественные растительные агенты, инактивирующие

микробных возбудителей заболеваний. Эти соединения, синтезируемые

в тканях растений в ответ на внедрение фитопатогенов, могут

служить высокоспецифичными замените-

лями пестицидов. Фитоалексин перца успешно применяли при фитофторозе. Могут

быть использованы также вещества, стимулирующие синтез фитоалексинов в

растительных тканях.

3. Использование микробов-антагонистов, вытесняющих патогенный вид и

подавляющих его развитие.

4. Иммунизация и вакцинация растений. Вакцинные препараты стремятся вводить

непосредственно в прорастающие семена.

5. Введение в ткани растений специфичного агента (d-фактора), снижающего

жизнеспособность возбудителя.

Биологические средства — важная составная часть комплексной программы

защиты растений. Эта программа предусматривает проведение защитных

мероприятий агротехнического, биологического и химического плана наряду с

использованием устойчивых сортов растений. Задачей комплексной программы

является поддержание численности вредителей растений на экологически

сбалансированном уровне, не наносящем ощутимого вреда культурным растениям.

Биологические удобрения. Биологические (бактериальные) удобрения применяют

для обогащения почвы связанным азотом. Большое распространение получили

препараты нитрагин и азотобактерин — клетки клубеньковых бактерий и

азотобактера, к которым добавляют стабилизаторы (мелассу, тиомочевину) и

наполнитель (бентонит, почву). Азотобактерин обогащает почву не только

азотом, но и витаминами и фитогормонами, гиббереллинами и гетероауксинами.

Препарат фосфо-бактерин из Bacillus megaterium превращает сложные

органические соединения фосфора в простые, легко усвояемые растениями.

Фосфобактерин также обогащает почву витаминами и улучшает азотное питание

растений.

Растения синтезируют ряд соединений, регулирующих их рост и развитие

(фитогормоны, биорегуляторы). К их числу принадлежат ауксины, гиббереллины,

цитокинины. Созревание плодов стимулирует этилен. Эти биорегуляторы находят

применение в сельском хозяйстве. К числу новых, обнаруженных в последние

годы биорегуляторов относят пептиды, имеются перспективы их применения в

сельском хозяйстве.

Биотехнология и животноводство.

Большое значение в связи с интенсификацией животноводства отводится

профилактике инфекционных заболеваний сельскохозяйственных животных с

применением рекомбинантных живых вакцин и генноинженерных вакцин-антигенов,

ранней диагностике этих заболеваний с помощью моноклональных антител и

ДНК/РНК-проб.

Для повышения продуктивности животных нужен полноценный корм.

Микробиологическая промышленность выпускает кормовой белок на базе

различных микроорганизмов — бактерий,

грибов, дрожжей, водорослей. Богатая белками биомасса одноклеточных

организмов с высокой эффективностью усваивается сельскохозяйственными

животными. Так, 1 т кормовых дрожжей позволяет получить 0,4- 0,6 т свинины,

до 1,5 т мяса птиц, 25—30 тыс. яиц и сэкономить 5—7 т зерна (Р. С. Рычков,

1982). Это имеет большое народнохозяйственное значение, поскольку 80%

площадей сельскохозяйственных угодий в мире отводятся для производства

корма скоту и птице.

Одноклеточные организмы характеризуются высоким содержанием белка — от 40

до 80% и более. Белок одноклеточных богат лизином, незаменимой

аминокислотой, определяющей его кормовую ценность. Добавка биомассы

одноклеточных к недостаточным по лизину растительным кормам позволяет

приблизить их аминокислотный состав к оптимальному. Недостатком биомассы

одноклеточных является нехватка серусодержащих аминокислот, в первую

очередь метионина. У одноклеточных его приблизительно вдвое меньше, чем в

рыбной муке. Этот недостаток присущ и таким традиционным белковым кормам,

как соевая мука. Питательная ценность биомассы одноклеточных может быть

значительно повышена добавкой синтетического метионина.

Производство кормового белка на основе одноклеточных — процесс, не

требующий посевных площадей, не зависящий от климатических и погодных

условий. Он может быть осуществлен в непрерывном и автоматизированном

режиме.

В нашей стране производится биомасса одноклеточных, в особенности на базе

углеводородного сырья. Достигнутые успехи не должны заслонять проблемы,

возникающей при использовании углеводородов как субстратов для

крупномасштабного производства белка, — ограниченность их ресурсов.

Важнейшими альтернативными субстратами служит метанол, этанол, углеводы

растительного происхождения, в перспективе водород.

Очищенный этанол на мировом рынке стоит почти вдвое дороже метанола, но

этанол отличается очень высокой эффективностью биоконверсии. Из 1 кг

этанола можно получить до 880 г дрожжевой массы, а из 1 кг метанола-до 440

г. Биомасса из этанола особенно богата лизином — до 7%.

Большое значение для животноводства имеет обогащение растительных кормов

микробным белком. Для этого широко применяют твердофазные процессы.

Перспективными источниками белка представляются фото-трофные

микроорганизмы, в особенности цианобактерии рода Spirulina и зеленые

одноклеточные водоросли из родов Chlorella и Scenedesmus. Наряду с обычными

аппаратами для их выращивания используют искусственные водоемы. Добавление

к растительным кормам биомассы Scenedesmus позволяет резко повысить

эффективность усвоения белков животными.

Таким образом, существуют разнообразные источники сырья для получения

биомассы одноклеточных. Некоторые субстраты (этанол) дают столь

высококачественный белок, что он может быть рекомендован в пищу.

Цианобактерии рода Spirulina издавна используют в пищу ацтеки в Центральной

Америке и племена, обитающие на озере Чад в Африке.

2. Технологическая биоэнергетика

Технологическая биоэнергетика — одно из направлений биотехнологии,

связанное с эффективным использованием энергии, запасаемой при фотосинтезе.

Это может быть достигнуто путем: 1) превращения биомассы, накопленной в

результате фотосинтеза в дешевое и высококалорийное топливо — метан и

другие углеводороды, этанол и т. д.; 2) модификации самого процесса

фотосинтеза, в результате которой энергия света с максимальной

эффективностью используется на образование водорода или другого топлива,

минуя стадию фотоассимиляции СО2 и синтеза компонентов клетки. На уровне

теоретических разработок находится идея непосредственного преобразования

энергии Солнца в электрическую (биофотоэлектрические преобразователи

энергии).

Рассмотрим вначале путь, пролегающий через использование биомассы, в первую

очередь, растительной, ресурсы которой в мире огромны и оцениваются в 100

млрд. т по сухому веществу в год. Лишь незначительная часть ее расходуется

человечеством, но и эта часть дает до 14% потребляемой в мире энергии.

Биомасса — не только возобновляемый и почти даровой источник энергии, но и

альтернатива тающим запасам полезных ископаемых.

Получение этанола как топлива.

Этанол — экологически чистое топливо, дающее при сгорании СО2 и Н2О. Он

используется в двигателях внутреннего сгорания в чистом виде или как 10—20%-

ная добавка к бензину (газохол). В Бразилии уже к 1983 г. 75% автомобилей

работали на 95%-ном этаноле, а остальные — на газохоле. В США предполагают

заменить на этанол 10% потребляемого бензина. Широкое внедрение этанола

планируется в странах Западной Европы.

На значительных посевных площадях намечают выращивать сельскохозяйственные

культуры, предназначенные для биотехнологической переработки в этанол. В

условиях дефицита посевных площадей возникает проблема, которая уже в наши

дни актуальна для Бразилии и выражается дилеммой: продовольствие или

энергия. Производство этанола из растительного сырья не является

безотходным: на каждый литр спирта при-

ходится 12—14 л сточных вод с высокой концентрацией отходов, опасных для

природных экосистем. Проблема рациональной переработки этих отходов не

решена.

Классическим биообъектом, используемым при получении спирта, являются

дрожжи Saccharomyces cerevisiae. Дрожжи имеют ряд недостатков.

1. Конкуренция брожения и дыхания. Субстрат (например, глюкоза) лишь

частично сбраживается до этанола. Оставшаяся часть безвозвратно теряется,

превращаясь в результате дыхания в СО2 и Н2О. Процесс необходимо вести в

анаэробных условиях или применять мутанты дрожжей, утратившие митохондрии и

не способные к дыханию.

2. Чувствительность к этанолу, которая снижает выход целевого продукта на

единицу объема биореактора. Получены устойчивые к этанолу мутанты,

характеризующиеся измененным строением клеточных мембран.

3. Отсутствие ферментов, катализирующих расщепление крахмала, целлюлозы,

ксилана. Необходим предварительный гидролиз субстрата или засев биореактора

смешанной культурой, содержащей, помимо S. cerevisiae, микроорганизмы с

соответствующей гидролитической активностью.

Бактерия Zymomonas molilis, применявшаяся центральноамериканскими индейцами

для сбраживания сока агавы, более эффективно сбраживает сахара и более

устойчива к этанолу. Дальнейшее повышение устойчивости Z. mobilis к этанолу

достигается добавлением в среду инкубации Mg2+ и ряда нуклео-тидных

компонентов.

Термофильные бактерии, продуценты этанола характеризуются высокой скоростью

роста и метаболизма, чрезвычайно стабильными ферментами, необычной для

остальных бактерий устойчивостью к этанолу (до 15% и более). Термофилы

способны к биоконверсии полисахаридных субстратов в этанол. Так,

Thermoanaerobium brockii сбраживает крахмал, Clostridium thermocellum —

целлюлозу, Cl. thermohydrosulfuricum утилизирует продукты деградации

целлюлозы с очень высоким выходом спирта. Перспективно применение

экстремально термофильного продуцента спирта Thermoanaerobacter

ethanolicus. Планируют использование также ацидофильных (оптимум рН 1,5) и

галофильных продуцентов спирта.

Повышение выхода спирта и стабилизация активности его продуцентов могут

быть достигнуты путем иммобилизации клеток. Так, эффективный синтез этанола

осуществлен с применением клеток Z. mobilis, иммобилизованных на

хлопчатобумажных волокнах (S. Prentis, 1984).

Получение метана и других углеводородов.

Получение метана — важный путь утилизации сельскохозяйственных отходов. Он

получается в виде биогаза — смеси метана и СО2. Присутствие СО2

ограничивает теплотворную способность биогаза как топлива, которая в

зависимости от соотношения СН4/СО2 составляет 20,9—33,4 кДж/м3. Содержание

метана в биогазе варьирует от 50 до 85%.

Непосредственно к образованию метана способна небольшая группа

микроорганизмов, относящихся к архебактериям. Жизнедеятельность

метанобразующих архебактерий протекает в строго анаэробных условиях.

Субстратами для образования метана могут служить муравьиная и уксусная

кислоты, метанол, газовые смеси (Н2 + СО, Н2 + СО2). Поскольку биогаз

практически получают из сложных органических веществ (целлюлозы, крахмала,

белков, липидов, нуклеиновых кислот), то для метан-образования применяют

многокомпонентные микробные ассоциации.

Наряду с метанобразующими бактериями в состав таких ассоциаций входят

микроорганизмы, переводящие органические субстраты в метанол, муравьиную и

уксусную кислоты, Н2, СО и т. д. Примером может служить метаногенная

ассоциация «Methanobacillus Kuzneceovii», образующая метан при разложении

биомассы водорослей (Чан Динь Тоай, 1984).

Процесс метанобразования отличается высокой эффективностью: до 90—95%

используемого углерода переходит в метан. Поэтому метаногенные ассоциации с

успехом используют для очистки сточных вод от органических загрязнений с

одновременным получением высококалорийного топлива. До 5—10% потребленного

углерода превращается в биомассу, которая также находит применение.

Используют как жидко-, так и твердофазные процессы получения биогаза

(биогазификации).

Наряду с биогазом метаногенные ассоциации образуют другие ценные продукты,

например витамин В12 После переработки органического субстрата в биогаз

остается материал, представляющий собой ценное минеральное (азотное и

фосфорное) удобрение.

Получение биогаза — процесс, отличающийся простотой оборудования и

доступностью сырья, требует небольших капиталовложений. В Китае, Индии,

ряде других стран эксплуатируются небольшие установки, в которые вносят

подручный материал (солому, навоз и др.), что исключает затраты на доставку

сырья. В Китае действует свыше 7 млн. малых установок вместимостью 10—15 л,

достаточных для удовлетворения энергетических потребностей семьи из пяти

человек.

Кроме метаногенных анаэробов существует другая группа организмов —

продуцентов углеводородов как заменителей топлива. Это микроводоросли —

Botryacoceus, Isochrysis, Nanochlo-ropsis и др. Углеводороды накапливаются

в значительных количествах — до 80% сухой массы клеток. В США действует

ферма для выращивания водорослей с суммарной площадью водоемов 52 тыс.

гектаров, дающая около 4800 м3 жидких углеводородов в сутки. Для улучшения

топливных характеристик полученные из водорослей углеводороды подвергают

гидрированию (Г Н Чернов, 1982).

Получение водорода как топлива будущего.

Получение водорода как топлива пока остается на уровне поисковых

разработок. Это абсолютно чистое топливо, дающее при сгорании лишь Н2О,

отличается исключительно высокой теплотворной способностью — 143 кДж/г.

Химический и электрохимический способы получения Н2 неэкономичны, поэтому

заманчиво использование микроорганизмов, способных выделять водород. Такой

способностью обладают аэробные и анаэробные хемотрофные бактерии, пурпурные

и зеленые фототрофные бактерии, цианобактерии, различные водоросли и

некоторые простейшие (Е. Н. Кондратьева, И. Н. Го-готов, 1981). Процесс

протекает с участием гидрогеназы или нитрогеназы.

Гидрогеназа — фермент, содержащий FeS-центры. Она катализирует реакцию

2Н+ + 2е- = Н2

Одна из технологических возможностей основана на включении изолированной

гидрогеназы в состав искусственных Н2-генерирую-щих систем. Сложной

проблемой является нестабильность изолированного фермента и быстрое

ингибирование его активности водородом (продуктом реакции) и кислородом.

Повышение стабильности гидрогеназы может быть достигнуто ее иммобилизацией

(Чан Динь Тоай, 1984; Y. Nosaka et. al., 1986). Иммобилизация предотвращает

ингибирование гидрогеназы кислородом.

Предложено много вариантов модельных систем, катализирующих образование

водорода из воды за счет энергии света. Эти системы различаются механизмом

улавливания энергии света и содержат хлоропласты или изолированный из них

хлорофилл, а также восстановленные никотинамидные нуклеотиды. Некоторые

системы наряду с водородом образуют кислород: в этом случае речь идет о

Страницы: 1, 2, 3, 4